胎牛血清细胞培养中如何防止黑点的生成?-彩客app

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胎牛血清细胞培养中如何防止黑点的生成?
文章来源:上海沪峰化工有限公司   添加时间:2020/9/9 9:29:58 点击率:961

有客户问胎牛血清细胞培养中如何防止黑点的生成?对此我们进行了多次试验,得出以下结论,对此一定要做好以下几点,方可使细胞培养顺利。

(1)尽可能地减少血清冻融次数。

(2)培养基无需37℃水浴。

(3)培养基保持ph值7.0- 7.2。

(4)严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。

(5)掌握细胞传代的时机,细胞切勿生长过老。 


1、化冻

将血清从-20度冰箱中取出,室温(或浸于自来水中)化冻(约需要30分钟至2小时,也可放于4度冰箱化冻过夜;化冻后若不马上灭活,可以放入4度冰箱中暂时保存。 

2、灭活

(1)放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个空的血清瓶,内装100ml自来水,插入一根温度计,温度监控以此为准)

(2)当温度计显示56度时,停止加热,改为间断加热,维持56度(±0.5度)30分钟(±3分钟;若不小心使温度上升超过56度,则:若仍未超过60度,且时间很短,比如不超过5分钟,则仍可使用;若超过60度,或者时间较长,则弃去不用,或者尝试用于一些普通细胞的培养)

(3)取出,自然冷却至室温(约需1-3小时),可分装或-20度继续冻存。

3、分装

(1)转入无菌间,在超净台内将血清分装入10ml离心管中(注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀; 用吸液管或吹大管吹出血清时要注意:不要吹出气泡(血清很粘稠,很容易产生气泡;如果产生气泡, 则在酒精灯火焰上过一下) )

(2)放入-20度冰箱冻存

(3)全部操作约需要4-6小时

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